オリゴ精製用精製装置

1. ゲル電気泳動クロマトグラフィー精製
精製には変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動クロマトグラフィーを使用します。変性剤は通常 4M ホルムアミドまたは 7M 尿素で、アクリルアミドの濃度は 5 ～ 15%、メタクリルアミドの割合は主に 2 ～ 10% です。
電気泳動後、紫外光の照射下で核酸バンドの位置を決定する必要があり、標的核酸を含むゲルを切断し、核酸を粉砕して浸出し、その後、浸出液を濃縮、脱塩し、定量化され、凍結乾燥されています。

2. DMT-On、HPLC 精製
合成中に DMT-On モードを選択し、アミノ分解後に粗生成物を遠心分離し、室温で濃縮して過剰なアンモニアを除去しました。
分離は、溶離液としてアセトニトリルおよび 10% トリエチルアミン酢酸 (TEAA) を使用する C18 カラムを使用して実行されました。溶出終了後、濃縮し、トリフルオロ酢酸でDMT基を除去する。中和後、一部の塩と小分子がカットオフチューブを通して除去され、最終的に脱塩されます。

この方法はより純度の高い製品が得られますが、脱プリンの発生に注意する必要があります。

3. DMT オフ、HPLC 精製
合成中に DMT オフを選択し、粗生成物を遠心分離し、アンモノリシス後に過剰なアンモニアを除去するために室温で濃縮しました。
分離は、溶離液としてアセトニトリルおよび水中の１０％トリエチルアミン酢酸を用いてＣ１８カラムを使用して実施した。分離が完了して定量化された後、アリコートは凍結乾燥されます。

この方法は分離条件を慎重に調整する必要があるが、比較的純粋な目的分子を得ることができる。