典型的な DNA、RNA、および非天然核酸の合成では、脱保護およびカップリングのステップが重要な役割を果たします。
脱保護ステップでは、固体支持体上の DMT 基または前のヌクレオシドの 5' ヒドロキシル基を有機酸で除去し、次のカップリングステップのためにヒドロキシル基を露出させます。脱保護ステップの実行には、3% トリクロロ酢酸のジクロロメタンまたはトルエン溶液が主に使用されます。トリクロロ酢酸の濃度と脱保護時間 (脱ブロック時間) が最終生成物の純度を左右します。濃度が低く、脱ブロック時間が不十分であると、未反応の DMT 基が残り、収率が低下し、望ましくない不純物が増加します。脱ブロッキング時間が長いと、合成配列の脱プリンが生じ、予期しない不純物が形成される可能性があります。
カップリングステップは、溶媒の水分含有量と空気中の湿気の影響を受けやすくなります。合成中の水の濃度は 40 ppm 未満、できれば 25 ppm 未満である必要があります。無水合成条件を維持するために、核酸合成は低湿度環境で行う必要がありますので、お客様には、アミダイト溶解装置、粉末または油状のホスホラミダイトを無水アセトニトリルに溶解して、空気との接触を避けることができます。
ホスホラミダイトの溶解は水以外の状況での方が優れており、分子トラップが試薬とアミダイト中の微量の水を吸着するため、分子トラップ.50 ～ 250 ml 試薬ボトルには 2 g、250 ～ 500 ml 試薬ボトルには 5 g、500 ～ 1000 ml 試薬ボトルには 10 g、1000 ～ 2000 ml 試薬ボトルには 20 g のサブシーブを推奨します。
ホスホラミダイトの溶解は不活性雰囲気下で実行する必要があり、活性剤試薬とアセトニトリルの交換は時間内に完了する必要があります。キャッピング試薬と酸化試薬はできるだけ早く使用する必要があります。開封された試薬は保存期間が短く、合成中の活性も低下します。
投稿日時: 2022 年 8 月 9 日